炭疽病由炭疽菌属受到，是亚洲最繁重的花草病虫害中之一，兼具强危害性、分布不均广、感然范畴大等特殊性。电化学灭菌剂仍是现阶段防治法炭疽病的重要科技手段，但过度使用引起病源体抗药理作用、水环境污染破坏和食物应急等问题。花草是自然抗白色念珠菌化合物的宝库，定制开发花草源灭菌剂兼具选用性强、对非的目标生物学相对比较应急、环保节能等优缺点。

2024年11月烟台先进材料与绿色制造山东省实验室杨军丽研发员微商团队在Postharvest Biology and Technology杂志上发表题为“Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy”文章。研究利用DIA蛋白质组学技术，揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理，为防治炭疽病提供了新的思路。拜谱生物为该研究提供了DIA蛋白酶组学技术工艺服务。

2英文标题文字：绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬有效控制炭疽病真菌Colletotrichum gloeosporioides

刊物：Postharvest Biology and Technology

2028年引响指数：6.4

发布日期：2024年11月

客人院校：烟台先进材料与绿色制造山东省实验室

探讨用料：绞股蓝皂苷GP5处理后的炭疽病真菌C. gloeosporioides

拜谱出具枝术：DIA血清组学

研发构思：

探讨毕竟

GP5对炭疽菌的抑制性角色

通过 菌丝种植效率法测定化合物GP4-GP7对菌丝生长的抑制作用，结果显示GP4-GP7的EC50值分别为96.98、27.5、38.48和61.59 mg/L。其中，GP5表现出最强的抑制效果，在12.5 mg/L浓度下，其抑制效果显著优于其他化合物。当GP5浓度为25 mg/L时，对炭疽菌的抑制率接近50%。此外，GP5的抗真菌活性超过了常用的化学农药百菌清和植物源农药苦参碱（图1）。

图1 GP5名词解释设计相仿性有机化合物对球孢梭菌菌丝出现的关系

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过显微镜观察观察，发现在GP5浓度为EC50时，孢子萌发受到明显抑制；而在400 mg/L浓度下，孢子完全不萌发。培养8小时后，GP5处理组的孢子萌发率显著低于对照组。在400 mg/L浓度下，孢子芽管长度仅为11.11 μm，而对照组的芽管长度已达到92.70 μm。这表明GP5能够有效抑制炭疽菌孢子的萌发和芽管伸长（图2）。

图2 用EC50和400mg/L氧化还原电位办理GP5后的孢子不断涌现和芽管的长度

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024） 研发会发现，GP5并能合理有效可以抑制造用红苹果系统6手机、巨峰草莓和番茄上的炭疽病斑寻址。当GP5氧浓度值起到500 mg/L时，红苹果系统6手机、巨峰草莓和番茄的炭疽病起病率同质性拉低。在1000 mg/L氧浓度值下，GP5对红苹果系统6手机、巨峰草莓和番茄的炭疽病都同质性可以抑制造用的功效（图3）。

图3 GP5可减缓球孢梭菌对收成球果的毒力

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

GP5净化处理后炭疽菌菌体发生改变实际情况

通过扫描拍摄光学显微镜观察（SEM）和散射电商体视显微镜（TEM）观察，发现GP5处理后的炭疽菌菌丝部分脱水，细胞壁结构发生变化（图4）。在400 mg/L浓度下，GP5处理的菌丝细胞壁粘附增强。TEM观察显示，GP5处理后，细胞内的线粒体结构变得模糊，线粒体嵴断裂，细胞器结构难以辨认，并且出现了自噬体和自溶酶体。这些结果表明，GP5通过诱导自噬导致细胞死亡，从而发挥抗菌作用。

图4 GP5补救后的电镜关察

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过荧光显微镜观察，发现GP5处理后的炭疽菌细胞中出现大量红色荧光，表明存在大量的酸性囊泡结构，如自噬体和溶酶体（图5）。这与之前的TEM观察结果一致，证实了GP5诱导的自噬现象。此外，GP5处理后，细胞内钙离子（Ca2+）浓度升高，进一步激活自噬系统。

图5 GP5医治后的AO染色剂

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

通过JC-1刺绣法检测线粒体膜电位，发现GP5处理后，线粒体膜电位显著下降。随着GP5浓度的增加，红色荧光逐渐减弱，绿色荧光逐渐增强，表明GP5能够诱导线粒体膜损伤，破坏线粒体功能，进而触发线粒体自噬（图6）。

图6 人体细胞内Ca2+密度和线粒体膜电势差波动

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

蛋白质组学定性分析

通过DIA淀粉酶质组学科技，发现GP5处理后，炭疽菌中有271个蛋白质表达发生显著变化，其中214个上调，57个下调（图7）。GO功能分析显示，差异表达蛋白主要参与代谢过程和细胞过程。KEGG通路分析显示，差异表达蛋白主要富集在有机物质代谢、细胞氮化合物代谢和基因表达等途径。特别是，自噬相关蛋白Atg8的表达上调，进一步证实了GP5通过自噬途径发挥抗真菌作用。

图7 淀粉酶质组学毕竟

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

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研究发现绞股蓝皂苷GP5能够有效抑制炭疽菌的生长和致病性。通过体外实验，GP5显著抑制了炭疽菌菌丝的生长和孢子萌发，其效果优于常用的化学农药氯噻酮和植物源农药苦参碱。进一步的电镜观察和球蛋白组学分析显示，GP5通过激活自噬途径，诱导细胞内自噬体和自溶酶体的形成，从而导致炭疽菌细胞死亡。

图8 GP5反击C. gloeosporioides的抗真菌孢子工作机制。

（图源：Y. Liu, et al., POSTHARVEST BIOL TEC., 2024）

拜谱总结

研究采用DIA血清组学，揭示了绞股蓝皂苷GP5通过激活自噬机制有效控制炭疽菌的机理。这一发现不仅为防治炭疽病提供了新的思路，还展示了DIA蛋白组学在植物病理学研究中的强大应用潜力。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，率先引进赛默飞最新一代质谱仪Astral，并且专家团队总结多年DIA蛋白组项目经验，结合Astral质谱仪高稳定性、高灵敏度、高通量、高深度的特性对样品制备、分离技术、算法软件、实验设计全流程进行多维迭代更新，助力蛋白组学检测。此外，拜谱生物还提供转录组学、全文翻译后修饰语组、分解组学以及两组学合作新产品技术服务，欢迎致电咨询！

选取论文：

Liu Y, Li X, Gong C, et al. Gypenoside GP5 effectively controls Colletotrichum gloeosporioides, an anthracnose fungus, by activating autophagy[J]. Postharvest Biology and Technology, 2025, 220: 113305.